Бульон для выделения энтерококков (энтерококкозель бульон) – обогатительная среда для выделения энтерококков из проб, содержащих многочисленную сопутствующую микрофлору. Многие микроорганизмы, такие как сапрофитные нейссерии, стафилококки, гемофилы, негемолитические стрептококки и некоторое количество энтеробактерий, ингибируются полностью или частично.
Казеиновый и соевый пептоны являются источниками питательных веществ, необходимых для роста микроорганизмов. Декстроза – ферментируемый углевод, источник углерода и энергии. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. Цитрат натрия – дополнительный источник углерода. Азид натрия – ингибитор. Сульфит натрия при восстановлении образует H 2 S. L-цистин снижает окислительно-восстановительный потенциал за счет удаления кислорода, поддерживая низкое значение Eh. Кристаллический фиолетовый – индикатор pH.
Инокулировать и инкубировать 18−24 часа при 35°C в нормальной атмосфере. Рост энтерококков определяется по образованию гранулированного осадка на дне пробирки, причем находящаяся над ним жидкость – без осадка или слегка мутная. На этом этапе выполняется окрашивание по Граму и производится пересев штрихом на чашки с кровью (Агар триптиказеино-соевый (кат. № 1068) или Основа кровяного агара (кат. № 1108)) для определения типа гемолиза и выделения чистых культур. Для дифференциации стрептококков и пневмококков поместить диски с бацитрацином и оптохином в область посева на чашках с кровяным агаром и инкубировать в рекомендуемых условиях 18–24 часа при 35±2°C.
Провести окрашивание по Граму, каталазный тест и тест на растворимость в желчи с характерными колониями, взятыми из чашек с кровяным агаром или культурой, выросшей в бульоне.
Присутствие цепочек грамположительных кокков различной длины, ингибируемых бацитрацином в низкой концентрации, отрицательных по каталазе и нерастворимых в желчи или солях желчных кислот, является предварительной идентификацией бета-гемолитических стрептококков группы A. Окончательную идентификацию стрептококков можно осуществить с помощью других биохимических тестов, таких как гидролиз эскулина, гидролиз пирувата и т.п. Помимо этого можно провести серологическое типирование с использованием методов с антисыворотками по Лансфилду (Lancefield) или более традиционных методов коагглютинации по Эдвардсу и Ларсону (Edwards and Larson).
Микробиологический тест
Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах после инкубации при 35±2°C и наблюдались через 18–24 часа.
Микроорганизмы |
|
Escherichia coli ATCC 25922 |
Ингибируется |
Enterococcus faecalis ATCC 19433 |
|
Enterococcus faecium ATCC 27270 |
Основа селективного бульона Болтона - Bolton Selective Enrichment Broth (Base) for microbiology
Питательная среда Мерк, Германия (Merck KGaA)
Кат. №1.00068.0500
Упаковка - 500 г
Селективный накопительный бульон Болтона для выявления Campylobacter
Принцип действия
Селективный бульон Болтона содержит питательные вещества, которые способствуют выявлению даже поврежденных клеток кампилобактера. Не требуется создание микроаэрофильных условий. Внесение в среду селективной добавки ингибирует рост сопутствующей грамположительной и грамотрицательной микрофлоры.
Состав (г/л)
Пептон из мяса 10,0; гидролизат лактальбумина 5,0; дрожжевой экстракт 5,0; хлорид натрия 5,0; кетоглутаровая кислота 1,0; пируват натрия 0,5; бисульфит натрия 0,5; карбонат натрия 0,6; гемин 0,01.
Приготовление
Растворить 13,8 г в 500 мл дистиллированной воды. Автоклавировать 15 мин при 121°С и охладить до 45°С. Добавить в асептических условиях 25 мл лизированной лошадиной крови и содержимое 1 флакона селективной добавки Bolton Broth Selective Supplement (Кат. N 1.00079.0001) к бульону Болтона. Тщательно перемешать и разлить бульон в стерильные флаконы с завинчивающимися крышками. После добавления образца свободный промежуток между завинчивающейся крышкой и уровнем бульона должен составлять приблизительно 2 см.
рН 7,4 ±0,2 при 25°С.
Готовая среда во флаконе имеет темно-красный или почти черный цвет.
Проведение анализа
Размешать 25 г образца в 225 мл селективного бульона Болтона и инкубировать на протяжении 4 часов при температуре 37°С. Затем продолжить инкубацию при температуре 41,5°С на протяжении 14-44 часов.
Сделать пересев через 18 часов и 48 часов соответственно на Campylobacter Blood Free Selective Agar селективном агаре (Кат.№ 1.00070.0500), который не содержит кровь.
Прямой скрининг на наличие Campylobacter jejuni и c oli проводят с использованием экспресс-тестов Singlepath ® Campylobacter (Кат.№1.04143.0001).
Контроль качества
Тест-штаммы |
Рост после 48 часов |
Campylobacter jejuni ATCC 33291 |
> 10 6 КОЕ/мл |
Campylobacter jejuni ATCC 29428 |
> 10 6 КОЕ/мл |
Campylobacter coli ATCC 33559 |
> 10 6 КОЕ/мл |
E. coli ATCC 25922 |
|
Canida albicans ATCC 10231 |
Селективная добавка к бульону Болтона - Bolton Broth Selective Supplement
Кат. №1.00079.0010
Упаковка - 10 флаконов
Селективная добавка для приготовления селективного бульона Болтона для выявления Campylobacter
Принцип действия
Селективная добавка Болтона содержит смесь 4 различных антибиотиков в лиофилизированном виде в соответствии со стандартом ИСО 10272-1. Ванкомицин, цефоперазон и триметоприм ингибирует рост грамположительных и грамотрицательных бактерий. Амфотерицин в значительной степени ингибирует рост дрожжей и плесневых грибов.
Состав (из расчета на 1 флакон)
Ванкомицин 10 мг; цефоперазон 10 мг; триметоприм 10 мг; амфотерцин 10 мг.
Приготовление
Добавить 5 мл смеси стерильной дистиллированной воды и этанола (соотношение 50:50) к смеси антибиотиков. Тщательно перемешать. Смесь должна раствориться полностью.
Добавить содержимое флакона 5 мл к 500 мл стерильного бульона Болтона (Bolton Selective Enrichment Broth , Кат.№100068), охлажденного до 45-50 о С, хорошо перемешать.
Владельцы патента RU 2553224:
Группа изобретений относится к биотехнологии. Варианты питательной среды для селективного накопления энтеробактерий содержат панкреатический гидролизат рыбной муки, либо пептон мясной, либо панкреатический гидролизат рыбной муки и пептон мясной (в соотношении 1:1), желчь очищенную модифицированную (ЖОМ), натрий хлористый, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый в заданном соотношении. Изобретения позволяют повысить эффективность накопления энтеробактерий, селективные свойства среды и упростить способ получения питательной среды. 3 н.п. ф-лы, 3 табл., 9 пр.
Изобретение относится к санитарной и клинической микробиологии и может быть использовано для селективного накопления энтеробактерий из воды, пищевых продуктов, клинического материала и т.д.
Ведущие зарубежные фирмы: Merck «Микробиология», 2004-2005 стр.202; HiMedia (HiMedia Laboratories Pvt. Limited (Индия), 1993, стр.80; и ООО «ГЕМ» «Среды бактериологические». Каталог 2009-2010, стр.48, выпускают накопительный бульон для энтеробактерий по Мосселю на основе панкреатического гидролизата желатина или пептона мясного. Компонентное содержание в г/л представлено в табл.1.
Для бактериологического контроля в соответствии с Государственной Фармакопеей Российской Федерации, XII издание, регламентирующей перечень питательных сред для селективного обогащения энтеробактерий, предусмотрен бульон Мосселя (Enterobacteria Enrichment Broth-Mossel) ОФС 42-0067-07.
Селективное накопление всех видов энтеробактерий в бульоне Мосселя обусловлено тем, что высокая концентрация бычьей желчи в совокупности с бриллиантовым зеленым подавляет рост сопутствующей микрофлоры, а глюкоза способствует росту энтеробактерий. Натриево-калийные фосфаты обеспечивают большую буферную емкость в среде, что защищает культуру от губительного действия образующейся кислоты.
До настоящего времени в России в связи с отсутствием отечественной коммерческой сухой питательной среды для селективного обогащения энтеробактерий в практике клинической и санитарной микробиологии используется бульон Мосселя лабораторного приготовления, а для контроля микробиологической чистоты лекарственных сред - среда №3 (среда обогащения для бактерий семейства Enterobacteriaceae).
Недостатками бульона Мосселя лабораторного изготовления в соответствии с рецептурой, представленной в ГФ, XII издание, и среды №3 являются:
Сложность приготовления;
Использование в качестве элективного фактора неочищенной желчи крупного рогатого скота - вещества химически неопределенного состава, затрудняющего получение объективных результатов;
Отсутствие отечественных сухих препаратов - пептона и желчи, обладающих высокой степенью прозрачности в растворах;
Необходимость фильтрации в случае использования основных компонентов среды отечественного производства, как дополнительный этап в процессе приготовления;
Слабая ингибирующая способность в отношении сопутствующих грамположительных микробов ассоциантов при обеспечении роста энтеробактерий;
Увеличение себестоимости среды в случае необходимости использования импортных препаратов.
Наиболее близким к предлагаемому бульону Мосселя является коммерческий бульон Мосселя (Merck), который состоит из следующих компонентов, г/л:
Недостатком коммерческой среды (Merck) является:
Недостаточная эффективность при росте и селективном накоплении ряда энтеробактерий;
Недостаточно выраженные ингибирующие свойства в отношении микробов-ассоциантов;
Ограниченная доступность.
Задачей изобретения является создание отечественной сухой питательной среды для селективного накопления энтеробактерий, обладающей большей эффективностью, с более высокими селективными свойствами, обеспечивающей доступность и получение объективных результатов бактериологического контроля.
Поставленная задача решается тем, что предлагается питательная среда для селективного накопления энтеробактерий, сухая, содержащая белковую основу, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый, причем в качестве белковой основы она содержит панкреатический гидролизат рыбной муки, либо пептон мясной, либо панкреатический гидролизат рыбной муки и пептон мясной (в соотношении 1:1), желчь очищенную модифицированную (ЖОМ) и натрий хлористый при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
Вариант первый:
Вариант второй:
Вариант третий:
Технический результат достигается за счет предварительной подготовки сырой желчи. С этой целью нативную желчь КРС кипятят и фильтруют через фильтровальную ткань (бельтинг) в изоэлектрических точках, при каждом значении pH, с целью осаждения белков и высокомолекулярных пептидов. Заключительный этап подготовки желчи состоит из адсорбции примесей активным углем, внесения расчетного количества двузамещенного фосфата натрия в пересчете на содержание сухих веществ, кипячения и фильтрации. Это позволяет исключить дополнительное внесение фосфата натрия в состав среды, обеспечивая высокую буферную емкость готовой среды и ее прозрачность. Сбалансированность компонентного состава среды, включая панкреатический гидролизат рыбной муки (ПГРМ), в качестве белковой питательной основы, обеспечивает хорошие ростовые и селективные свойства бульона Мосселя.
Способ получения бульона Мосселя предусматривает смешивание сухих компонентов, г/л:
Панкреатический гидролизат рыбной муки или пептон мясной обеспечивают ростовые потребности микроорганизмов в азотистом питании. Предварительная подготовка желчи КРС позволяет получить сухую желчь очищенную модифицированную (ЖОМ), обеспечивающую высокую буферную емкость и прозрачность готовой питательной среды, ингибирующие свойства в отношении нежелательной сопутствующей бактериальной флоры и селективное накопление энтеробактерий, не угнетаемое в результате образования кислых продуктов жизнедеятельности.
Отличием предлагаемой среды от прототипа является возможность использования наряду с пептоном мясным панкреатического гидролизата рыбной муки в качестве белковой основы. Технология подготовки сырой желчи с использованием натрия фосфорнокислого двузамещенного исключает дополнительное внесение его в среду. Количественное соотношение компонентов питательной среды, ее pH, обеспечивают среде сохранение хороших ростовых свойств, эффективность накопления энтеробактерий и ингибирующий эффект в отношении сопутствующей микрофлоры. Готовая среда сохраняет стерильность не менее 10 суток
Для достижения технического результата на стадии производства желчи очищенной модифицированной (ЖОМ) желчь после осаждения белков в изоэлектрических точках, адсорбции примесей активным углем с внесением двузамещенного фосфата натрия из расчета 12,0 г на каждые 20,0 г желчи, в пересчете на сухое вещество, сушат на сушильной установке в виброкипящем слое А1-ФМУ.
Пример 1. Для приготовления среды по первому варианту берут навески следующих ингредиентов, г/л:
Предлагаемая среда, прозрачная, зеленого цвета, обеспечивает рост и накопление следующих тест-штаммов семейства Enterobacteriaceae при посеве по 0,5 мл микробной взвеси из разведения 10 -7:
E. coli O55:K59 3912/41
S. flexneri 1a 8516
S. typhimurium 79
K. pneumonia 418
K. pneumonia 3534/51
Предлагаемая среда в значительной степени ингибирует рост грамположительных микроорганизмов, в частности S. aureus Wood-46, из разведения 10 -1 .
Используемые для контроля среды тест-штаммы микроорганизмов получены из отдела коллекционных культур ФБУН ГНЦ ПМБ.
Готовят стандартную взвесь культуры каждого тест-штамма, соответствующую 10 единицам по стандартному образцу мутности ОСО 42-28-85 П, с использованием стерильного 0,9% раствора натрия хлористого. Полученные взвеси культур десятикратными разведениями (4,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида с 0,5 мл микробной взвеси) доводят до разведения 10 -7 (для S. aureus Wood-46 - до разведения 10 -1) и используют для контроля среды.
Для определения ростовых свойств засев производят по 0,5 мл микробной взвеси каждого из тест-штаммов из разведения 10 -7 в 5,0 мл бульона Мосселя, т.е. 10 м.к./мл среды. Посевы инкубировали при температуре (37±1)°C в течение 20-24 ч. Результаты биологического контроля лабораторных образцов бульона Мосселя на наборе тест-штаммов представлены в таблице 2.
Пример 2. Среду готовят в соответствии с примером 1.
Пример 3. Среду готовят в соответствии с примером 1.
Результаты биологического контроля представлены в таблице 2 и аналогичны результатам проверки по примеру 1.
Пример 4. Для приготовления бульона Мосселя в соответствии со вторым вариантом берут навески следующих ингредиентов, г/л:
Навески размешивают в 1 л дистиллированной воды, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют автоклавированием при температуре 121°C в течение 5 мин.
Пример 5. Среду готовят в соответствии с примером 4.
Результаты биологического контроля представлены в таблице 3 и аналогичны результатам проверки примеров 1, 2, 3 по варианту 1.
Пример 6. Для приготовления бульона Мосселя в соответствии с третьим вариантом берут навески следующих ингредиентов, г/л:
Навески размешивают в 1 л дистиллированной воды, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют автоклавированием при температуре 121°C в течение 5 мин.
Результаты биологического контроля бульона Мосселя в соответствии с вариантом 3 представлены в таблице 3 и аналогичны результатам проверки по примерам 1, 2, 3.
Пример 7. Среду готовят в соответствии с примером 6.
Результаты биологического контроля представлены в таблице 3 и аналогичны результатам проверки по примерам 1, 2, 3.
Пример 8. Среду готовят в соответствии с примером 1.
Результаты биологического контроля представлены в таблице 2.
Оценка качества предлагаемой среды для селективного накопления энтеробактерий с нарушением количественного соотношения ингредиентов:
Пример 9. Среду готовят в соответствии с примером 1.
Результаты биологического контроля представлены в таблице 2. Нарушение количественного соотношения ингредиентов среды в примерах 8, 9 ведет к ухудшению ростовых, ингибирующих свойств и, как следствие, снижению коэффициента эффективности накопления энтеробактерий.
Из таблиц сравнительных характеристик биологического контроля (табл.2, 3) видно, что предлагаемая питательная среда в соответствии с примерами 1-7 обладает хорошими ростовыми свойствами, эффективна в накоплении энтеробактерий и подавляет рост стафилококка.
Визуальный учет результатов накопления энтеробактерий по окончании срока инкубации посевов показал идентичные результаты в испытуемых и контрольной средах.
Изменение количественного соотношения компонентов среды ведет к нарушению биологических показателей качества предложенной среды.
Так, в случае приготовления среды в соответствии с примерами 8, 9 наблюдается снижение эффективности накопления энтеробактерий и ингибирующего эффекта среды в отношении S. aureus Wood-46.
Для получения данных по показателю эффективности бульона Мосселя засеянные пробирки каждого тест-штамма, содержащие около 10 м.к./мл - (нулевой посев) инкубировали при температуре (37±1)°C в течение 3 ч. Для определения посевной дозы 0,1 мл микробной взвеси каждого тест-штамма из разведения 10 -7 высевали на чашки Петри с ГРМ агаром. После инкубации посевов в накопительной среде содержимое пробирок перемешивали и производили аналогичный высев на ГРМ агар.
Через 18-20 часов инкубации посевов на ГРМ агаре при температуре (37±1)°C производили подсчет сформировавшихся колоний. Показатель эффективности рассчитывали по приросту числа колоний после инкубации культуры в накопительной среде к числу колоний при нулевом посеве.
Сравнительная характеристика эффективности бульона Мосселя по варианту 1 представлена в таблице 3. Результаты эффективности накопления энтеробактерий бульона Мосселя, приготовленного в соответствии вариантами 2, и аналогичны и сопоставимы с результатами, полученными при испытании бульона Мосселя, вариант 1.
Таким образом, разработана отечественная конкурентоспособная сухая питательная среда для селективного обогащения энтеробактерий, имеющая ряд преимуществ:
эффективность накопления энтеробактерий в 1,5-2,0 раза выше, чем в коммерческой среде;
коэффициент ингибиции в отношении стафилококка более чем в 100 раз превышает показатель коммерческого накопительного бульона;
питательная среда проста в приготовлении;
разработана технология осветления желчи в изоэлектрических точках с использованием активного угля и двузамещенного фосфата натрия, исключающая дальнейшее внесение его в питательную среду, обеспечивающая прозрачность готового препарата;
исключена необходимость использования безводного натрия фосфорнокислого двузамещенного при изготовлении сухого препарата;
возможность использования панкреатического гидролизата рыбной муки наряду с пептоном мясным при сохранении ростовых и селективных свойств;
Таблица 1 | |||||
Накопительный бульон для энтеробактерий по Мосселю | |||||
№ п/п | Наименование компонентов | ЭО бульон Мосселя ЕЕ Broth, Mossel HiMedia | Энтеробактериальный бульон обогащения по Мосселю ООО «ГЕМ» | Бульон Мосселя для обогащения энтеробактрий (Enterobacteria Erichment Broth-Mossel ОФС 42-0067-07) | |
1 | Панкреатический гидролизат желатина | - | - | 10,0 | 10,0 |
2 | Пептон мясной | 10,0 | 10,0 | - | - |
3 | Глюкоза моногидрат | 5,5 | 5,0 | 5,0 | 5,0 |
4 | Желчь бычья | 20,0 | 20,0 | 20,0 | 20,0 |
5 | Натрий фосфорнокислый двузамещенный | 8,0 | 6,45 | 7,0 | 8,0 |
6 | Калий фосфорнокислый однозамещенный | 2,0 | 2,0 | 3,0 | 2,0 |
7 | Бриллиантовый зеленый | 0,015 | 0,0135 | 0,015 | 0,015 |
pH готовый среды | 7,2±0,2 | 7,2±0,2 | 7,2±0,2 | 7,2±0,2 |
Таблица 2 | ||||||||
Сравнительная характеристика биологического контроля бульона Мосселя на основе панкреатического гидролизата рыбной муки, г/л | ||||||||
№ п/п | Наименование тест-штамма | Разведение | Вариант 1 | Вариант 1 | Вариант 1 | Вариант 1 | Вариант 1 | Накопительный бульон для энтеробактерий по Мосселю (Бульон Мосселя) Merck |
Пример 1 | Пример 2 | Пример 3 | Пример 8 | Пример 9 | ||||
1 | E. coli 25922 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
2 | E. coli 055:K59 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ осадок |
3912/41 | 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | |
3 | S. flexneri la 8516 | 10 -7 | ++ | ++ | ++ | + | + | ++ |
10 -6 | ++ | ++ | ++ | ++ | + | +++ | ||
4 | S. typhimurium 79 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ | ||
5 | K. pneumonia | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
418 | 10- 6 | +++ | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ газ | |
6 | S. aureus-Wood-46 | 10 -1 | Нет диффузного помутнения среды | Нет диффузного помутнения среды | + слабое диффузное помутнение среды | Нет диффузного помутнения среды | Нет диффузного помутнения среды | |
Таблица 3 | |||||||
Сравнительная характеристика биологического контроля бульона Мосселя на основе мясного пептона и смеси ПГРМ с мясным пептоном в соотношении 1:1, г/л | |||||||
№ п/п | Наименование тест-штамма | Разведение | Вариант 2 | Вариант 2 | Вариант 3 | Вариант 3 | Накопительный бульон для энтеробактерий по Мосселю (Бульон Мосселя) Merck |
Пример 4 | Пример 5 | Пример 6 | Пример 7 | ||||
1 | E. coli 25922 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ |
10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
2 | E. coli 055:K59 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | +++осадок |
3912/41 | 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | |
3 | S. flexneri la 8516 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
4 | S. typhimurium 79 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
5 | K. pneumonia | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
418 | 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++газ | |
6 | S. aureus-Wood-46 | 10 -1 | Нет диффузного помутнения среды | Нет диффузного помутнения среды | Нет диффузного помутнения среды | Нет диффузного помутнения среды | Нет диффузного помутнения среды |
*+++ - отличный рост с диффузным помутнением среды; ++ - хороший рост с диффузным помутнением среды; |
1. Питательная среда для селективного накопления энтеробактерий, сухая (Бульон Мосселя), содержащая белковую основу, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый, отличающаяся тем, что в качестве белковой основы содержит панкреатический гидролизат рыбной муки, дополнительно содержит желчь очищенную модифицированную (ЖОМ) и натрий хлористый при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
2. Питательная среда для селективного накопления энтеробактерий, сухая (Бульон Мосселя), содержащая пептон мясной, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый, отличающаяся тем, что она содержит желчь очищенную модифицированную (ЖОМ) и натрий хлористый при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
3. Питательная среда для селективного накопления энтеробактерий, сухая (Бульон Мосселя), содержащая белковую основу, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый, отличающаяся тем, что в качестве белковой основы содержит панкреатический гидролизат рыбной муки и пептон мясной в соотношении 1:1, дополнительно содержит желчь очищенную модифицированную (ЖОМ) и натрий хлористый при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
Похожие патенты:
Изобретение касается набора олигонуклеотидных праймеров и зондов для идентификации и субтипирования ДНК бактерии Pasteurella multocida серотипов А, B, D, E, F методом ПЦР в режиме реального времени.
Изобретение касается набора флуоресцентно-меченых олигонуклеотидных зондов для типирования штаммов Burkholderia mallei. Входящие в состав набора зонды имеют структуру «шпильки» с флуорофором и гасителем флуоресценции на концах и обладают комплементарностью к продуктам реакции амплификации с праймерами.
Изобретение относится к пищевой микробиологии, в частности к получению питательной среды для определения в кондитерских изделиях, микроорганизмов, вырабатывающих липазы.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления продуцирующих уреазу микроорганизмов, в частности Helicobacter pylori. Для этого проводят экспресс-анализ на диагностических дисках для определения уреазной активности образцов.
Группа изобретений относится к биохимии. Предложен способ получения стандартного образца мутности бактерийных взвесей, стандартный образец мутности бактерийных взвесей, применение стандартного образца мутности бактерийных взвесей, а также набор, содержащий стандартный образец мутности бактерийных взвесей.
Представлены наборы олигонуклеотидных зондов и праймеров, биологический микрочип и тест-система для идентификации и типирования вируса гриппа А и В. Охарактеризованная тест-система содержит: набор реагентов для выделения РНК вируса гриппа из биологического материала человека; набор реагентов для проведения ПЦР-амплификации, совмещенной с обратной транскрипцией, с образованием флуоресцентно-меченных фрагментов генома вируса гриппа, содержащий описанные олигонуклеотиды-праймеры; набор реагентов для проведения гибридизации фрагментов ДНК, полученных после проведения амплификации на биочипе, содержащем элементы с иммобилизованными описанными олигонуклеотидными зондами; и при необходимости, отрицательный и положительный контрольные образцы.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к определению содержания микроорганизмов в различных объектах и средах. Способ предусматривает конъюгацию бактерий с электрохимической меткой, в качестве которой используют Fe0, MgFe2O4 или Fe3O4, осуществляемую в водной среде при заданных параметрах.
Изобретение относится к области медицинской микробиологии и биотехнологии, в частности к микробиологической лабораторной диагностике инфекционных болезней. Питательная среда содержит триптон, дрожжевой экстракт, глюкозу, хлорид натрия, эритроциты человека 0(I) группы Rh(+), сульфат железа(II), агар «Дифко» и дистиллированную воду при заданных соотношениях компонентов.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при бактериологических исследованиях по выделению и идентификации бактерий рода Klebsiella, производстве питательных сред для этих исследований.
Заявлена группа изобретений, относящихся к пищевой и бродильной промышленности: культуры чайного гриба Fungi Tea, Medusomyces gisevii alfa и Medusomyces gisevii, а также способ получения сброженной основы для производства кваса, способ получения культуральной жидкости чайного гриба и способ получения напитков из овощного сока или сброженных овощей.
Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии и сельскому хозяйству и может быть использовано для получения бактериального препарата против болезней растений, вызываемых фитопатогенными грибами рода Fusarium, Microdochium, Pyrenophora и Puccinia. Иммуногенная композиция для лечения или профилактики clostridium difficile, способ ее получения и способ индукции иммунного ответа к c. difficile // 2550271
Предложены иммуногенная композиция для применения при лечении или профилактике заболеваний, связанных с Clostridium difficile, способ получения такой композиции, путем смешивания входящих в ее состав ингредиентов и способ индуцирования иммунного ответа к C.
Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Microbacterium species депонирован под регистрационным номером BKM Ac-2615D, применяемый для очистки солоноватоводных и морских водоемов. Изобретение обеспечивает усиление разрушения в нефти нафтеновых фракций, гетероциклических соединений и смол, а также полиароматических соединений, бензо(а)пирена бензо(а)антрацена. 1 ил., 2 табл., 1 пр.
Группа изобретений относится к биотехнологии. Варианты питательной среды для селективного накопления энтеробактерий содержат панкреатический гидролизат рыбной муки, либо пептон мясной, либо панкреатический гидролизат рыбной муки и пептон мясной, желчь очищенную модифицированную, натрий хлористый, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый в заданном соотношении. Изобретения позволяют повысить эффективность накопления энтеробактерий, селективные свойства среды и упростить способ получения питательной среды. 3 н.п. ф-лы, 3 табл., 9 пр.
Bolton Enrichment Broth Base
Назначение
Жидкая культуральная среда, используемая для выделения Campylobacter из пищевых образцов, согласно стандартам ISO 10272-1:2006.
Описание
Основа бульона Bolton - обогатительный бульон для Campylobacter из проб пищевых продуктов. При обработке и хранении продуктов питания клетки Campylobacter повреждаются, их размножение и рост могут быть простимулированы двойной инкубацией в бульоне Болтона.
Мясная пептонная вода и гидролизат лактальбумина являются источниками необходимых для роста углерода и азота. Хлористый натрий обеспечивает осмотический баланс, а карбонат натрия нейтрализует кислоту, образующуюся при росте микроорганизмов. Дрожжевой экстракт и кетоглутаровая кислота действуют как факторы роста. Включение метабисульфита натрия, пирувата натрия и гемина нейтрализует токсические субстанции, которые могут образовываться в культуральной среде под действием кислорода, и позволяют обходиться без микроаэробной атмосферы. Лизированная кровь необходима для нейтрализации присутствующих в среде антагонистов триметоприма.
Селективность этапа обогащения оптимизируется селективной добавкой (Артикул 06-131-LYO): ванкомицин активен в отношении грамположительных микроорганизмов. Цефоперазон в основном действует на грамотрицательные бактерии. Триметоприм эффективен в отношении широкого круга грамположительных и грамотрицательных клеток, а циклогексимид или амфотерицин В являются эффективными фунгицидами.
Приготовление
Растворить 13,8 г порошка в 500 мл дистиллированной воды, при необходимости нагреть. Стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС. Остудить до 47-50°C, асептически добавить 25 мл лизированной лошадиной крови и 1 флакон Селективная добавки Campylobacter Bolton (Артикул 06-131-LYO). Хорошо смешать. Приготовленную среду разлить в соответствующие контейнеры.
Примечание: Если бульон для обогащения приготовлен заранее, его можно хранить при комнатной температуре не более 4 часов или в темноте при температуре 3 ± 2°C не более 7 дней.
Техника посева
Образец вносят в среду в количестве (по массе или объему), в девять раз меньшем объема селективного обогатительного бульона Bolton, чтобы получить соотношение тестируемый образец/среда 1:10 (в/о или о/о), и гомогенизируют.
Селективный бульон для обогащения Bolton не требует инкубации в микроаэробных условиях, но должен применяться в плотно завинчивающихся контейнерах, заполненных так, чтобы сверху оставалось свободное пространство высотой менее 20 мм.
Инкубируют исходную суспензию при температуре 37°C в течение 4-6 часов, затем при 41,5°C в течение 44 ± 4 часов.
Методы выделения и идентификации см. в ISO или Руководстве по бактериологическому анализу (BAM).
Хранение
Среда предназначена только для использования в лабораториях. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности <60%)
Контроль качества